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考马斯亮蓝G250染料试剂由考马斯亮蓝G250、乙醇、磷酸等组成，用于考马斯染料结合(Bradford)分析的总蛋白测量，其特点在于对蛋白样品中可能存在的大多数盐、溶剂、缓冲液、硫醇、金属螯合剂、还原性物质等均不排斥，检测浓度下限达到25μg/mL，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μL，在50～1000μg/mL浓度范围内有较好的线性关系。

• 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也应溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
  
• 需可检测560～610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm。
  
• 建议每次测定时都做标准曲线，因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定应每次都做标准曲线。
  
• 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时应考虑根据比色皿的最小检测体积；应按比例适当加大考马斯亮蓝G250染料试剂的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大；使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 稀释蛋白标准(一般为BSA 5mg/mL)使其终浓度为0.5mg/mL。注意：蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也应用什么溶液稀释，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准。
  
• 将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20μL加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释液补足至20μL。
  
• 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液至20μL。
  
• 各孔加入200μL考马斯亮蓝G250染料试剂，室温放置3～5min。
  
• 酶标仪测定595nm波长处的吸光值，560～610nm之间的波长也可。
  
• 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。